42 BISp Jahrbuch Forschungsförderung 2014 15 Nachweis von Eigenblutdoping 3 Ergebnisse Die Proben von 6 Probanden Alter 27 8 3 4 Jahre Größe 181 2 7 cm Gewicht 80 5 4 5 kg aus Gruppe 2 EK Lagerung wurden mit der small RNA Seq Technologie analysiert Durch den definier ten Cut Off Wert von durchschnittlich 50 Reads pro miRNA wurde die Anzahl der identifizierten miRNA von potentiellen 2578 auf 193 relevante miRNA reduziert Diese 193 miRNAs wurden nor malisiert in die Software GenEx importiert und weiter analysiert Diese Software bietet zusätzlich zur normalen Hauptkomponentenanalyse Principal Component Analysis PCA eine sog dynamische PCA dPCA an Mit Hilfe dieses Algorithmus können miRNAs mit steigendem P Wert aus der Analyse ausgeschlossen werden so dass am Ende ein Biomarker Muster entsteht welches es erlaubt zwischen den unterschiedlichen Behandlungen zu unterscheiden Proben aus dem Arm 3w 1w versus Pro ben aus dem Blutbeutel 0w 6w siehe Abb 2 Diese Clusterbildung basiert auf 10 höchst signifikant regulierte miRNA Biomarkern Verglichen mit Zeitpunkt 0w hatte die Dauer der Lagerung keinen weiteren Einfluss Die erste Hauptkomponente PC1 beschreibt den größten Anteil der Varianz und zeigt eine eindeutige Trennung zwischen den frischen Proben aus dem Arm und den gelagerten Pro ben aus dem Blutbeutel Abb 2 dPCA von 6 Probanden Die Software GenEx wählte zwischen 193 relevanten miRNAs die geeig netsten 10 miRNAs aus die den Unterschied zwischen Proben aus dem Arm rote Punkte und den Proben aus dem Blutbeutel blaue Punkte zeigen Der Pfeil markiert einen Ausreißer Die von GenEx erzeugte Heatmap siehe Abb 3 verdeutlicht mit grüner und roter Farbe ein niedriges bzw hohes Expressionslevel der miRNA Gleichzeitig sind an den Seiten der Heatmap auch zwei Dend rogramme eingezeichnet Dendrogramme werden dazu genutzt um Beziehungen zwischen Clustern darzustellen Das Dendrogramm oben zeigt in Zusammenhang mit der Expression der miRNAs noch einmal die eindeutige Trennung von Arm und Blutbeutelproben Allerdings zeigte die Probe von Pro band 10 zum Zeitpunkt 6w P10 6w ein etwas gegenläufiges Verhalten das auch in der dPCA Abb 2 aufgefallen ist Die Probe wurde dort mit einem Pfeil markiert Es handelt sich hierbei wahrscheinlich um einen Ausreißer Das zweite Dendrogramm auf der linken Seite fasst die miRNA zusammen die ein ähnliches Verhalten aufweisen so dass zuerst die 5 nach unten regulierten miRNAs dargestellt werden und danach die 5 nach oben regulierten miRNAs

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